—успенз≥йна культура
–ослинн≥ суспенз≥йн≥ культури складаютьс¤ з поодиноких кл≥тин ≥ кл≥тинних агрегат≥в, ¤к≥ ростуть в аерованому поживному середовищ≥ певного складу. ƒл¤ вирощуванн¤ кл≥тинних суспенз≥й використовуютьс¤ в основному т≥ ж поживн≥ середовища, що й дл¤ калусних культур. ќднак, на сьогодн≥шн≥й день створен≥ середовища, ¤к≥ використовуютьс¤ безпосередньо дл¤ вирощуванн¤ суспенз≥йних культур, оск≥льки калусн≥ та суспенз≥йн≥ культури значно в≥др≥зн¤ютьс¤ за к≥льк≥стю вживаних м≥неральних солей, в≥там≥н≥в, стимул¤тор≥в росту.
—успенз≥йну культуру можна отримувати двома шл¤хами: внесенн¤м частинок ран≥ше отриманого калусу у р≥дке поживне середовище; використанн¤м експлант≥в тканин або стерильних проростк≥в, ¤к≥ у р≥дкому середовищ≥ утворюють калус. ≤нколи суспенз≥йну культуру ≥ндукують певною к≥льк≥стю гомогенату тканини, що м≥стить у своЇму склад≥ ¤к жив≥, так ≥ зруйнован≥ кл≥тини.
ƒл¤ отриманн¤ високодисперсноњ суспенз≥йноњ культури важливе значенн¤ маЇ тип вих≥дноњ калусноњ тканини. ќптимальною вважаЇтьс¤ калусна тканина пухкого типу.
јерац≥¤ культур у р≥дкому середовищ≥ забезпечуЇтьс¤ такими способами:
1) вирощуванн¤м кусочк≥в калусу на мостиках ≥з ф≥льтрувального паперу;
2) культурою кл≥тин, пом≥щених у р≥дке поживне середовище, на м≥шалках ротац≥йного або шейкерного типу (накопичувальне культивуванн¤);
3) вирощуђванн¤м кл≥тин у р≥дкому поживному середовищ≥ у культиваторах ≥ ферментерах шл¤хом барботажу або барботажу в поЇднанн≥ з механ≥чним перем≥шуванн¤м (неперервне культивуванн¤).
ќсновна к≥льк≥сть роб≥т, виконаних на суспенз≥¤х, присв¤чена вивченню њх росту та метабол≥зму в накопичувальн≥й культур≥. –≥ст кл≥тинноњ попул¤ц≥њ в цикл≥ вирощуванн¤ накопичувальноњ культури виражаЇтьс¤ 8-под≥бною кривою. ÷икл росту вим≥рюЇтьс¤ часом в≥д виходу культури в стац≥онарну фазу. ¬ процес≥ субкультивуванн¤ кл≥тини проход¤ть посл≥довно наступн≥ фази:
1) латентну або лаг-фазу;
2) експоненц≥альну (логарифм≥чну) фазу;
3) л≥н≥йну фазу;
4) стац≥онарну фазу;
5) фазу загибел≥ кл≥тин.
«вично накопичувальн≥ суспенз≥њ культивують до стац≥онарноњ фази росту, що у б≥льшост≥ випадк≥в складаЇ тривал≥сть пасажу 21-28 дн≥в ≥ попул¤ц≥ю ≥з 106 -5х106 кл≥тин/мл. онцентрац≥¤ кл≥тин у мл суспенз≥њ - щ≥льн≥сть кл≥тинноњ попул¤ц≥њ - один ≥з важливих показник≥в стану кл≥тинноњ системи в суспенз≥њ. ≥льк≥сть кл≥тин у мл дисоц≥йованоњ суспенз≥њ визначаЇтьс¤ загальноприйн¤тим способом - п≥драхунком п≥сл¤ нанесенн¤ на с≥тку л≥чильноњ камери √ор¤Їва або ‘укса-–езентал¤.
’арактерною особлив≥стю суспенз≥йних культур рослинних кл≥тин Ї морфолог≥чна ≥ б≥ох≥м≥чна гетерогенн≥сть. л≥тинна попул¤ц≥¤ м≥стить кл≥тини, ¤к≥ в≥др≥зн¤ютьс¤ за формою та розм≥рами. ќдн≥Їю ≥з ц≥кавих особливостей, що ви¤влена при вирощуванн≥ суспенз≥йних культур, Ї залежн≥сть њх розмноженн¤ в≥д одночасноњ або попередньоњ присутност≥ у середовищ≥ активних кл≥тин, що д≥л¤тьс¤.
≤ндукувати поодинок≥ кл≥тини до под≥лу можна, розташовуючи њх у контакт≥ ≥з калусною тканиною, що росте; пос≥вом на тверде середовище б≥л¤ кусочка тканини (тканина-н¤нька) або, культивуючи в середовищ≥, в ¤кому ран≥ше росла суспенз≥¤.
–≥ст суспенз≥њ значною м≥рою залежить в≥д вих≥дноњ кл≥тинноњ щ≥льност≥ ≥нокулюму. ожна культура маЇ т≥льки њй притаманну вих≥дну м≥н≥мальну ефективну щ≥льн≥сть попул¤ц≥њ (м≥н≥мальний ≥нокулюм, ≥з ¤кого можна ≥ндукувати р≥ст стац≥онарноњ суспенз≥йноњ культури), ¤кщо щ≥льн≥сть нижче за вих≥дну максимально ефективну, то значно подовжуЇтьс¤ лаг-пер≥од, або ж зовс≥м не спостер≥гаЇтьс¤ р≥ст.
|
|
|
|
