ультура ≥зольованих корен≥в
ультура ≥зольованих корен≥в Ї одним ≥з нових метод≥в досл≥дженн¤ ф≥з≥олог≥њ ≥ б≥ох≥м≥њ кореневоњ системи та њњ б≥осинтетичноњ активност≥. ¬ ≥зольован≥й культур≥ вирощують в≥др≥зки к≥нчик≥в корен≥в проростк≥в, зародк≥в непророслого нас≥нн¤, адвентивн≥ корен≥, отриман≥ в≥д вкор≥нених наземних орган≥в, що розвиваютьс¤ ≥з калусних культур, д≥л¤нки кореневих систем рослин. ¬ останньому випадку корен≥ невеликого д≥аметру стерил≥зують, промивають стерильною водою ≥ перенос¤ть на поживне середовище. “аку техн≥ку вперше застосував ћорель, ¤кий отримав позитивн≥ результати за допомогою р≥зних способ≥в стерил≥зац≥њ (г≥похлоритом кальц≥ю, хлорам≥ном, опром≥ненн¤м ультраф≥олетом). ќднак, цей спос≥б не знайшов широкого застосуванн¤, оск≥льки тканини корен¤ пошкоджуютьс¤ стерил≥зуючими речовинами.
«агальноприйн¤тим способом Ї отриманн¤ корен≥в ≥з стерильних проростк≥в. Ќас≥нн¤ стерил≥зують розчинами г≥похлориту кальц≥ю, хлорам≥ну (3-6%), пероксиду водню, сулеми (0,1%), етанолу (95%), бромноњ води. ƒл¤ нас≥нн¤ з твердою оболонкою або опушенн¤м кращ≥ результати даЇ стерил≥зац≥¤ концентрованою с≥рчаною кислотою. ” де¤ких випадках дл¤ покращенн¤ змочуванн¤ нас≥нн¤ попередньо обробл¤ють етанолом або де¤кий час перем≥шують у колбах ≥з стерил≥зуючими розчинами. ƒл¤ нас≥нн¤ р≥зних вид≥в рослин визначають оптимальн≥ умови стерил≥зац≥њ, п≥дбираючи стерил≥зуючий агент та час стерил≥зац≥њ. ѕ≥сл¤ зак≥нченн¤ стерил≥зац≥њ промит≥ дистильованою водою нас≥нини перенос¤ть по дек≥лька штук (залежно в≥д њх розм≥ру) у чашки ѕетр≥ на зволожений стерильною водою ф≥льтрувальний пап≥р, або в кон≥чн≥ колби на поверхню водного агару дл¤ пророщуванн¤. ѕрощуванн¤ провод¤ть в термостат≥ без осв≥тленн¤ при температур≥ +25 - +27∞—. –озм≥щенн¤ нас≥нин на агаризованому середовищ≥ ≥з сахарозою дозвол¤Ї ви¤вити можливу ≥нфекц≥ю в процес≥ њх проростанн¤.
јп≥кальн≥ в≥др≥зки корен≥в (≥нокулюми) стерильних проростк≥в (висота проростк≥в 30-40 мм) перенос¤ть в культуральний посуд з поживним середовищем. –озм≥щенн¤ дек≥лькох ап≥кальних верх≥вок корен≥в в культуральн≥й колб≥ призводить до швидкого зниженн¤ њх росту внасл≥док пог≥ршенн¤ газового режиму ≥ конкуренц≥њ за основн≥ поживн≥ елементи. ƒл¤ введенн¤ в культуру в≥дбирають найсильн≥ш≥ проростки з добре розвиненими головним та б≥чними корен¤ми. ≤зольован≥ корен≥ можна культивувати ¤к на твердому агаризованому, так ≥ в р≥дкому поживному середовищ≥. ѕродуванн¤ поживного середовища киснем покращуЇ р≥ст головного корен¤, зб≥льшуЇ к≥льк≥сть та ≥нтенсивн≥сть приросту б≥чних корен≥в.
ѕри розм≥щенн≥ в колб≥ з р≥дким поживним середовищем ≥нокулюми корен≥в повинн≥ знаходитис¤ на поверхн≥ р≥дкоњ фази, ≥ т≥льки в процес≥ росту вони занурюютьс¤ в розчин. ≤зольован≥ корен≥ можуть довгий час рости в середовищ≥ дуже простого складу, куди вход¤ть м≥неральн≥ сол≥, сахароза (або глюкоза) ≥ в≥там≥ни (т≥ам≥н, п≥ридоксин, н≥котинова кислота). ѕор≥вн¤но з ≥ншими органами, корен≥ чутлив≥ш≥ до д≥њ ауксин≥в та циток≥н≥н≥в, що впливають на х≥д процес≥в њх росту та метабол≥зму. орен≥ багатьох дводольних можуть усп≥шно рости без цих ф≥тогормон≥в, але дл¤ п≥дтриманн¤ безперевного росту корен≥в однодольних рослин ≥ де¤ких дводольних у склад поживного середовища необх≥дно вводити ауксини. ƒ≥¤ циток≥н≥н≥в на ≥зольован≥ корен≥ також залежить в≥д виду рослин ≥ умов культивуванн¤ корен≥в.
ƒл¤ корен≥в однодольних глюкоза Ї кращим джерелом вуглецю, н≥ж сахароза чи ≥нш≥ цукри.
≤зольован≥ корен≥ особливо чутлив≥ до чистоти компонент≥в поживного середовища - води, м≥неральних солей. –екомендуЇтьс¤ скорочувати час стерил≥зац≥њ середовища автоклавуванн¤м до 10-15 хв, щоб виключити можливий розклад њњ вуглеводневих ≥ орган≥чних компонент≥в. “ермолаб≥льн≥ компоненти середовища стерил≥зують ф≥льтруванн¤м через мембранн≥ ф≥льтри. ќптимальне значенн¤ рЌ дл¤ б≥льшост≥ кореневих культур складаЇ 4,8-5,2.
|
|
|
|
