ультивуванн¤ ≥зольованих кл≥тин ≥ тканин рослин в умовах in vitro
ультивуванн¤ ≥зольованих кл≥тин ≥ тканин рослин в умовах in vitro - метод збереженн¤ життЇздатност≥ ≥ розмноженн¤ орган≥в або њх частин, д≥л¤нок тканин ≥ окремих кл≥тин поза орган≥змом. л≥тини ≥ тканини, ¤к≥ вирощуютьс¤ ≥n vitro, ™ б≥олог≥чною моделлю, ¤ка в контрольованих умовах, близьких до природних, дозвол¤Ї вивчати механ≥зми кл≥тинних взаЇмод≥й, контакт≥в та њх регул¤торну роль. ¬≥дпов≥дно, одним ≥з принцип≥в методу культури тканин ≥ кл≥тин Ї в≥дтворенн¤ ≥n vitro умов, близьких (чи ≥дентичних) до тих, в ¤ких кл≥тини знаход¤тьс¤ в материнськ≥й рослин≥. ѕроте, нативн≥ умови ≥n vitro в ус≥х випадках дос¤гаютьс¤ ≥ в≥дтворюютьс¤ не в повн≥й м≥р≥. ” зв'¤зку з цим, кл≥тина знаходитьс¤ у в≥дносно ≥нших ф≥зичних умовах, що призводить до тимчасовоњ та ¤к≥сноњ зм≥ни в реал≥зац≥њ генетичноњ ≥нформац≥њ. Ќа ц≥й основ≥ методом культури тканин вир≥шуютьс¤ р≥зн≥ фундаментальн≥ ≥ прикладн≥ питанн¤.
ƒругою важливою умовою усп≥шного вирощуванн¤ рослинних кл≥тин ≥ тканин ≥n vitro Ї ступ≥нь, можлив≥сть репрес≥њ та депрес≥њ генетичноњ ≥нформац≥њ, а також здатн≥сть останньоњ до модиф≥кац≥йних та мутац≥йних зм≥н у нових ф≥зико-х≥м≥чних умовах культивуванн¤.
” даний час створена матер≥альна, техн≥чна ≥ методична основа вирощуванн¤ рослинних кл≥тин, тканин ≥ орган≥в. –озроблен≥ б≥отехнолог≥чн≥ принципи культури тканин ≥з збереженн¤м стерильност≥ та ≥нших ф≥зичних ≥ х≥м≥чних умов. ¬изначен≥ принципи плануванн¤ ≥ орган≥зац≥њ прим≥щенн¤ лаборатор≥њ. —творено спец≥альне обладнанн¤, посуд, ≥нструменти, матер≥али, розроблено склад поживних середовищ ≥ забезпечен≥ ≥нш≥ умови усп≥шного вирощуванн¤ кл≥тин, тканин ≥ орган≥в.
÷≥нн≥сть методу культури тканин пол¤гаЇ в тому, що з одного боку, об'Їктом досл≥джень Ї кл≥тина ¤к природна модель-одиниц¤ б≥олог≥чноњ активност≥, що наближуЇ умови експерименту до нативних. « ≥ншого боку, з певним ступенем автономност≥ одиниц¤ б≥олог≥чноњ активност≥ (кл≥тина, орган) вилучаЇтьс¤ з п≥д впливу корел¤тивних зв'¤зк≥в ≥ залежностей материнського орган≥зму. —творюютьс¤ умови ≥n vitro, ¤к≥ п≥ддаютьс¤ управл≥нню та регул¤ц≥њ. ÷е дозвол¤Ї к≥льк≥сно виразити результати експерименту ≥ встановити загальн≥, фундаментальн≥ б≥олог≥чн≥ законом≥рност≥.
–ослинна кл≥тина характеризуЇтьс¤ ун≥кальними особливост¤ми (тотипотентн≥сть, здатн≥сть гаплоњдних кл≥тин до в≥дновленн¤ ц≥лого орган≥зму, перех≥д до морфогенезу ≥ т.д.), тому вона може бути прекрасним об'Їктом у вир≥шенн≥ багатьох проблем загальноб≥олог≥чного значенн¤. –ослинна кл≥тина Ї об'Їктом дл¤ з'¤суванн¤ первинних процес≥в росту, диференц≥ац≥њ, взаЇмод≥њ м≥ж ¤дром ≥ цитоплазмою, стану генетичноњ ≥нформац≥њ, њњ зм≥ни та часовоњ реал≥зац≥њ.
ѕрактично вс≥ методичн≥ прийоми культури тканин грунтуютьс¤ на таких основних принципах:
- ≥золюванн¤ експланту (кл≥тина, кусочок тканини, орган) в≥д материнського орган≥зму;
- пом≥щенн¤ експланту в контрольован≥, ретельно п≥д≥бран≥ умови;
- дотриманн¤ умов стерильност≥ матер≥алу, що вирощуЇтьс¤.
ƒл¤ вирощуванн¤ культур тканин потр≥бно в≥дпов≥дн≥ матер≥али. Ќеобх≥дно мати у велик≥й к≥лькост≥ нег≥гроскоп≥чну вату ≥ марлю. ¬ату використовують дл¤ приготуванн¤ пробок, ватних тампон≥в дл¤ п≥петок ≥ скл¤них трубок, стерил≥зац≥њ робочих стол≥в. ћарл¤ необх≥дна дл¤ обгортанн¤ ватних пробок, ф≥льтрац≥њ середовищ, виготовленн¤ м≥шечк≥в та пов'¤зок.
ƒл¤ запоб≥ганн¤ висиханн¤ середовищ використовують ковпачки ≥з целофану, алюм≥н≥Ївоњ фольги, клейку стр≥чку. ƒл¤ обгортанн¤ посуду при стерил≥зац≥њ в автоклав≥ необх≥дний пергаментний пап≥р, товст≥ нитки або шпагат. Ќейлонова тканина р≥зноњ густоти, металев≥ сита р≥зного д≥аметру, необх≥дн≥ дл¤ ф≥льтруванн¤ кл≥тинних суспенз≥й.
ѕриготуванн¤ посуду дл¤ роботи з культурою тканин
ѕосуд дл¤ роботи з культурою тканин виготовл¤ють ≥з жарост≥йкого ≥ кислотост≥йкого бромсил≥катного скла типу Ђѕ≥рексї, що характеризуЇтьс¤ значною ст≥йк≥стю до високих температур ≥ механ≥чних пошкоджень.
¬есь посуд, призначений дл¤ приготуванн¤, збереженн¤ поживних середовищ ≥ вирощуванн¤ рослинного матер≥алу, п≥ддаЇтьс¤ ретельному миттю та обробц≥.
Ќайб≥льш поширеним ≥ над≥йним способом очистки скл¤ного посуду Ї його обробка концентрованою с≥рчаною кислотою з б≥хроматом кал≥ю прот¤гом 4-6 годин з наступним його промиванн¤м п≥д сильним струменем води прот¤гом 5-10 хв., дворазовим спол≥скуванн¤м дистильованою водою.
ѕриготуванн¤ хромовоњ сум≥ш≥: 9,2 г розтертого кристал≥чного б≥хромату кал≥ю (K2Cr2O7) обережно пом≥щають в 100 мл концентрованоњ с≥рчаноњ кислоти (Ќ2SO4) ≥, обережно пом≥шуючи, нагр≥вають у фарфоров≥й чашц≥ (стакан≥) на вод¤н≥й бан≥ до розчиненн¤.
ѕ≥сл¤ спол≥скуванн¤ дистильованою водою посуд висушують у сушильн≥й шаф≥ при +100 - +330∞— ≥ закривають ватними або целофановими ковпачками.
|
|
|
|
